Оглавление диссертации кандидат наук Чумакова, Вероника Валерьевна
ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение
1.2 Сведения об изученности химического состава растений рода
и возможность применения в медицине
Выводы по главе
Глава 2. Объекты и методы исследований
2.1 Объекты исследования
2.2 Методы идентификации, разделения и количественного определения, используемые при изучении биологически активных соединений
лофанта анисового
2.2.1 Хроматографические методы исследования
2.2.2 УФ – спектрофотометрия
2.2.3 Физические и химические методы исследования
2.3 Методы определения норм качества сырья лофанта анисового
2.3.1 Методы отбора проб для анализа
2.3.2 Методы морфолого-анатомического исследования
2.3.3 Определение числовых показателей сырья
2.3.4 Определение микробиологической чистоты сырья
2.3.5 Определение сроков годности сырья
2.4 Статистическая обработка данных
Глава 3. Фитохимическое исследование травы лофанта анисового
3.1 Эфирное масло
3.1.1 Выделение и изучение динамики накопления эфирного масла
3.1.2 Качественный состав эфирного масла травы лофанта анисового
3.2 Фенольные соединения
3.2.1 Идентификация фенольных соединений
3.2.2 Флавоноиды
3.2.3 Дубильные вещества
3.2.4 Галловая кислота
3.2.4.1 Разработка методики количественного определения галловой кислоты,
ее валидационная оценка
3.2.4.1 Изучение динамики накопления галловой кислоты методом планарной хроматографии
3.3 Тритерпеновые соединения
3.4 Органические кислоты
3.5 Полисахариды
3.6 Аминокислоты
3.7 Макро- и микроэлементы
Выводы по главе
Глава 4. Интродукционные исследования
4.2 Оценка содержания эфирного масла в образцах сырья лофанта анисового
при различных способах размножения и времени сбора сырья
Выводы по главе
Глава 5. Разработка норм качества сырья лофанта анисового травы
5.1 Изучение морфолого-анатомических признаков лофанта анисового
5.2 Определение основных числовых показателей травы
лофанта анисового
5.3 Установление норм качества лофанта анисового травы по содержанию действующих веществ
5.4 Установление срока годности сырья травы лофанта анисового
Выводы по главе
Глава 6. Фармакологический скрининг эфирного масла и водно-спиртовых извлечений из травы лофанта анисового
6.1 Изучение антимикробных свойств эфирного масла и спиртовых извлечений
из травы лофанта анисового
6.2 Изучение антиоксидантной активности извлечений из травы лофанта анисового
лофанта анисового
6.4 Изучение острой токсичности травы лофанта анисового
Выводы по главе
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
Приложение 1. Проект фармакопейной статьи предприятия
Приложение 2. Спецификация ФСП
Приложение 3. Инструкция по сбору и сушке травы лофанта анисового
Премьер
Введение
Степень разработанности исследования
Рядом научных исследований ученых Украины и Белоруссии доказана высокая антиоксидантная активность извлечений из травы лофанта анисового, фунгицидная активность эфирного масла. Трава лофанта анисового входит в
состав БАД “Сироп гибискуса с шиповником и лофантом”, а также в чайный напиток «Лофантовый».
Несмотря на многогранность терапевтического действия и широкое применение в народной медицине лофант анисовый продолжает оставаться малоизученным. До настоящего времени на траву лофанта анисового отсутствует нормативный документ, регламентирующий ее подлинность и качество.
Поэтому, фармакогностическое изучение лофанта анисового, широко используемого в народной медицине ряда стран, обоснование его применения в медицине и фармации России в качестве лекарственного растительного сырья и получения фитопрепаратов является весьма актуальным. Цель и задачи исследования
Цель работы заключается в фармакогностическом исследовании лофанта анисового, интродуцированного в условиях Ставропольского края, разработке методик его стандартизации и проведении фармакологического скрининга для обоснования возможности использования надземной части растения в качестве лекарственного растительного сырья.
Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:»
Научная новизна. Проведены фитохимические исследования травы лофанта анисового, интродуцированного в условиях Ставропольского края, что позволило
установить наличие и определить количественное содержание эфирного масла, флавоноидов, фенолокислот, полисахаридов, органических кислот, дубильных веществ, тритерпеновых соединений.
Впервые подобраны оптимальные условия для количественного определения эфирного масла и фенольных соединений, изучена динамика накопления эфирного масла, галловой кислоты по фазам вегетации и органам растения, что позволило определить оптимальные сроки заготовки сырья.
Методом газожидкостной хроматографии с масс-спектрометрией установлен компонентный состав эфирного масла, выявлены основные компоненты (ментон, пулегон), что послужило обоснованием для стандартизации и выделения нового сорта лофанта анисового, созданного в условиях Ставропольского края, в отдельный хемотип (ментоно-пулегоновый).
Для стандартизации сырья разработаны методики, подобраны оптимальные условия для качественного и количественного определения галловой кислоты, позволяющие подтвердить подлинность сырья травы лофанта анисового.
Методом ВЭЖХ идентифицировано 21 соединение фенольной природы: танин, эпикатехин, эпигаллокатехин галлат (ЭГКГ), дигидрокверцетин, апигенин/ лютеолин, гесперидин, кверцетин, рутин, кемпферол, о-метоксикумарин, генистеин, умбеллиферон; фенолкарбоновые кислоты: галловая, хлорогеновая, кофейная, феруловая, неохлорогеновая, коричная, п-кумаровая, цикориевая.
Методом спектрофотометрического анализа определено содержание флавоноидов и тритерпеновых кислот.
Впервые изучен состав аминокислот, определен набор макро- и микроэлементов, выделено и гравиметрически установлено количественное содержание 4 фракций полисахаридов (водорастворимые полисахариды, пектиновые вещества, гемицеллюлоза А и Б).
10.11.2010 г.). Выявлена возможность рентабельного культивирования нового сорта лофанта анисового и гарантированного получения качественного растительного сырья с высоким содержанием ценных БАС в почвенно-климатических условиях юга России.
Установлено отсутствие острого токсического действия извлечений травы лофанта анисового. Доказана антимикробная активность эфирного масла, антиоксидантное и пилотропное действия водных и водно-спиртовых извлечений травы лофанта анисового.
Теоретическая и практическая значимости результатов исследования
Теоретическая значимость. Сорт лофанта анисового Премьер выделен в новый хемотип – ментоно-пулегоновый.
Установленный комплекс БАС лофанта анисового свидетельствуют о перспективности проведения дальнейших фармакологических исследований с целью создания эффективных лекарственных препаратов.
Практическая значимость. На основании проведенных исследований, с учетом современных требований, предъявляемых к определению подлинности и качества лекарственного растительного сырья, проведена стандартизация травы лофанта анисового. Разработаны оптимальные методики для качественного и количественного определения эфирного масла и галловой кислоты. Определены оптимальные сроки заготовки сырья. Разработаны проект ФСП «Лофанта анисового трава», апробированный в ООО НПО «Альпика», г. Ставрополь, инструкция по сбору и сушке сырья, апробированная ГНУ Ставропольским НИИ сельского хозяйства Россельхозакадемии и ГНУ «Северо-Кавказского научно-исследовательского института горного и предгорного сельского хозяйства».
Методология и методы исследования
Методологической основой выполненного исследования является выбор объекта исследования на основе принципа филогенетического родства и системный подход к проведению фитохимического анализа и стандартизации нового вида растительного сырья – травы лофанта анисового. В процессе фармакогностического исследования использованы макроскопический,
микроскопический, фитохимический, товароведческий и полевой методы анализа, физико-химические и статистические методы анализа. Для выявления фармакологической активности использованы биологические методы анализа. Основные положения, выносимые на защиту:
результаты фитохимического изучения БАС травы лофанта анисового;
Степень достоверности и апробация результатов. Полученные результаты диссертационных исследований статистически обработаны. Разработанные методики количественного определения валидированы.
Основные положения работы доложены на 65-67 межрегиональных конференциях по фармации и фармакологии «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (г. Пятигорск, 2009-2011 гг.),1′ межрегиональной конференции «Актуальные проблемы фармацевтической науки и практики» (г. Владикавказ, 2009 г.), научно-методической конференции «Гаммермановские чтения – 2011» (г. Санкт-Петербург, 2011 г.). Научная работа признана победителем межрегионального научно-инновационного конкурса молодых ученых «У.М.Н.И.К.» (г. Ставрополь, 2007 г.), удостоена диплома межрегионального научно-инновационного конкурса «Золотой век инноваций» (г. Ставрополь, 2010 г.). По материалам диссертации опубликовано 14 печатных работ, в том числе 6 в журналах, рекомендуемых ВАК РФ.
1 2 3
Продолжение таблицы 1
1 2 3
Современное латинское название рода – А§аз1асЬе – происходит от слов “авап” (очень много) и ‘^асЬуз” (колос). Оно дано растениям в соответствии с одним из их основных внешних признаков – обилием колосовидных соцветий, расположенных на осевых и боковых побегах.
многолетнее травянистое растение до 2,1 м в высоту, стебель четырехугольный (в форме ромба в поперечном сечении), верхняя часть разветвленная, обычно с оттенком фиолетового цвета. Соцветие колосовидное (длиной до 15 см, 2 см в диаметре.). Цвет венчика колеблется от бледно-розового до фиолетового, проектирование значительно дальше чашечки. Листья супротивные, черешковые, грубо пильчатые, сердцевидные у основания, нижняя поверхность листьев варьирует от почти голой до опушенной. Листья имеют запах аниса [97,133].
чашечки 3-5 мм длиной, треугольные, заостренные, тычинок 4, выставляются в 2 пары, одна длиннее другой. Плоды продолговатые, около 2 мм длиной, коричневые, с маленькими волосками на верхушке [112,129,133].
Особое внимание в литературе уделяется внутривидовому распределению лофанта по хемотипам, которые отличаюстя преобладанием того или иного компонента в эфирном масле [70,118]. Выделено четыре хемотипа, в которых основными являются компоненты:
1. Метилхавикол (80%);
2. Пулегон (40%) и изоментон (29%);
3. Изоментон (45%) и пулегон (23%);
4. Изоментон (46%) и лимонен (23%) [118].
У видов и сортообразцов, имеющих ярко выраженный анисовый аромат сырья и эфирного масла, основным компонентом эфирного масла является фенол метилхавикол, очень близкий по строению и свойствам к анетолу. Содержание метилхавикола в эфирном масле лофанта колеблется от 57,7 до 93,3%.
У видов и сортообразцов, имеющих аромат мяты, основными компонентами эфирного масла являются моноциклические терпеновые кетоны – изоментон и
пулегон. Содержание изоментона варьирует от 16,7 до 55,5%, пулегона – от 36,7 до 47,8%.
Следует отметить, что доминирующие компоненты находятся в обратной зависимости: чем выше содержание в эфирном масле метилхавикола, тем ниже -пулегона и изоментона и наоборот [55,70].
Таблица 2 – Компонентный состав эфирного масла некоторых
Дитерпеноиды (дигидроагастол, агастол, агастохинон) Корни 141
Тритерпеноиды (олеаноловая и маслиновая кислоты, альдегид З-О-ацетилолеаноловой кислоты Корни 141
Стероид (Р-ситостерин, даукостерин) Корни 141
Фенилпропаноиды (сафрол, метилхавикол, эстрагол, метилэвгенол, анетол) Надземная часть 100,102,139
Фенолкарбоновые кислоты и их производные (розмариновая кислота, метиловый эфир розмариновой кислоты, метиловый эфир кофейной кислоты) Корни 92, 123
Лигнаны (агастинол, агастенол) Корни, надземная часть 117
Флавоноиды (акацетин, агастахозид, тилианин, изоагастохозид, агастахин, линарин, 7-О-гликозид апигентна, 7-0-гликозид акацетина, 7-О-гликозид диосметина, 7-О-гликозид лютеолина) Надземная часть, корни 137, 140
Фенолы и их производные (анисовый альдегид, метоксикоричный альдегид, винилин) Корни, надземная часть 100, 139
Высшие жирные спирты (линоленовая, линолевая, пальмитиновая, лауриновая, гексадекановая) Надземная часть, плоды 100, 139
Алифатические спирты, кетоны (октан-3-ол, 1-октен-З-ол, октан-3-он) Надземная часть, корни 104
Изучение липофильных фракций мяты перечной и тысячелистника обыкновенного (углеводородные экстракты) 2014 год, кандидат наук Зуев, Сергей Сергеевич
Технология полуфабрикатов из пряной зелени, высушенной методом сублимации 1984 год, кандидат технических наук Хоперия, Тинатин Титовна
Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Чумакова, Вероника Валерьевна, 2013 год
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
4. Агаджанян, Н. А. Химические элементы в среде обитания и экологический портрет человека/ Н. А. Агаджанян, А. В. Скальный. – М.: КМК, 2001.-83 с.
5. Адаскевич, В.П. Алопеция / В.П. Адаскевич, О.Д. Мяделец, И.В. Тихоновская. – Медицинская книга.- Н. Новгород: НГМА -2000,- 79 с.
6. Батюк, Л. Современные представления о препаратах и методах, применяемых для лечения и профилактики алопеции/ Л. Батюк. – Косметика и медицина.- 2005.- 6.- С. 12-23.
7. Бейдеман, И. Н. Методика изучения фенологии растений и растительных сообществ/ И. Н. Бейдеман, Г. И Галазий. -М.: Наука, 1974, -154 с.
8. Белоусова, Н. И. Химический состав эфирного масла багульников/ Н. И. Белоусова, В. А. Хан, А. В. Ткачёв //Химия раст. сырья. – 1999. Т. 3. С. 538.
9. Болдырев, М. А. Получение пищевых добавок на основе сухого экстракта из листьев лофанта анисового с антиоксидантными и противомикробными свойствами/ М. А. Болдырев, В. Б. Ковалев // Исследования молодых ученых – вклад в инновационное развитие России: материалы регион, науч-практич. конф. – Астрахань, 2011. -Т.2.- С.15-18.
10. Бубенчикова, В.Н. Разработка методов анализа растительного сырья, содержащего флавоноиды/ В.Н. Бубенчикова, Т.В. Точкова// Состояние и перспективы развития фармации в Сибири и на Дальнем Востоке: тез. докл. науч.-практической конф. – Томск, 1991. – С. 117-118.
12. Буданцев, А.Л. Дикорастущие полезные растения России/А.Л. Буданцев.-СПб.: СПФХА, 2001.-663 с.
13. Василенко, Ю.К. Получение и изучение физиологической активности тритерпенового вещества, выделенного из отходов производства экстракта чабреца/ Ю.К. Василенко, Э.Т. Оганесян, Л.И. Лисевицкая // Хим-фармац. журн. -1978.-9.-С. 61.
14. Васфилова, Е.С. Особенности интродукции в условиях Среднего Урала некоторых видов лекарственных и пряно-ароматических растений североамериканского происхождения / Е.С. Васфилова// Итоги интродукции и селекции травянистых растений на Урале: сб. науч. ст. – Екатеринбург, 2008. – С. 16-33.
15. Великородов, А. В. Количественное определение флавоноидов и фенольных соединений в чайном напитке «Лофантовый» / А. В. Великородов, В. В. Федорович, А. Г. Тырков //Естественные науки- Т. 28, . 3. – С. 73-77.
17. Волков, П.В. Изучение двух лекарственных форм 1-хлорметилсилатрана/ П.В. Волков, К.В Алексеев, Т.П. Калмыкова// Фармация.-2000.- 5-6.- С. 28-30.
Гаврилин, О. И. Попова, Е. А. Губанова// Химия раст. сырья. – 2010. – Т. 4. – С. 99-104.
19. Георгиевский, В. П. Биологически активные вещества лекарственных растений/ В.П. Георгиевский Н.Ф. Комиссаренко, С.Е. Дмитрук- М.: Наука, 1990. – 336 с.
21. ГОСТ 17768-90. Средства лекарственные. Упаковка, маркировка, транспортирование и хранение. – М., 2003. – 11 с.
22. ГОСТ 4564-79 «Листья скумпии». Госстандарт СССР.- М.: ИПК Издательство стандартов, 1995. – 8 с.
23. Государственная Фармакопея российской федерации – 12-е изд.- М.: Научный центр экспертизы средств медицинского применения», 2008. – 4.1. -704 с.
24. Государственная фармакопея СССР: Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье./ МЗ СССР. – 11-е изд., доп. – М..: Медицина, 1991.-397 с.
25. Государственная фармакопея СССР: Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье/ МЗ СССР.- 11-е изд., Вып.1. – М: Медицина, 1987.-336 с.
26. Гринкевич, Н. И. Химический анализ лекарственных растений/ Н. И. Гринкевич, Л.Н.Сафронич. – М.: Высш. шк.,1983. – 176 с.
28. Драгавцева, И. А. Ю. Анализ ресурсного потенциала земель Ставропольского края для возделывания плодовых культур/ И. А. Драгавцева, И. Ю. Савин. – М.: ФГНУ «Росинформагротех», 2007 – 136 с.
29. Ермаков, А. И. Методы биохимического исследования растений /А. И. Ермаков – Л.: Агропромиздат, 1987. – 480 с.
30. Запрометов, М.Н. Биосинтез фенольных соединений и его регуляция / М.Н. Запрометов// Успехи современной биологии. – 1971. – Вып. 2, Т. 72. – С. 219 252.
31. Изучение химического состава и противогрибковой активности ЬорЬапШш атэаШт ВепШ./ А. В. Великородов [и др.] //Химия раст. сырья. – 2010. -Т. 2.-С. 143-146.
32. Иммунотропные свойства флавоноидов лофанта анисового/ Е. Б. Хлебцова [и др.]//Фармация. -2012. -. 3. -С.12-15
33. Исследования по разработке фармакопейного метода определения содержания дубильных веществ в лекарственном растительном сырье/Н.А. Самылина [и др.]//Фармация. – 2009.-6. – С. 3-6.
34. Козеренко, Т. Д. Ионообменная хроматография аминокислот: (Теоретические основы и практика)/ Т. Д. Козеренко., С. Н. Зуев, Н. Ф. Муляр-М: Наука. Сиб. отд-ние, 1981.-160 с.
35. Кочетков, Н.К. Химия биологически активных природных соединений/ Н.К. Кочетков. – М.: Химия, 1970. – 486 с.
36. Красиков, В.Д. Основы планарной хроматографии/ В.Д. Красиков.-СПб.: Химиздат, 2005. – 232 с.
37. Кузьменко, А. Н. Стандартизация растительного сбора методом газожидкостной хроматографии / А. Н. Кузьменко //Вест. Москов. ун-та. – 2009. – Т. 50, . 4.-С. 278-281.
38. Лазурьевский, Г. В. Практические работы по химии природных соединений/ Г. В. Лазурьевский, И. В. Терентьева, А. А. Шамшурин- М.: Высш. шк., 1961.-187 с.
39. Ларькина, М. С. Изучение динамики накопления фенолкарбоновых кислот в надземной части василька шероховатого/ М. С. Ларькина, Т. В. Кадырова, Е. В. Ермилова //Химия раст. сырья. – 2008. – Т. 3. – С. 71-74.
40. Мавлянов, С.М. Растительные дубильные вещества/ С.М. Мавлянов, Ш.Ю. Исламбеков//Химия природ, соединений. – 2001. – 1. – С. 3-19
41. Минина, С.А. Химия и технология фитопрепаратов/ С.А. Минина, И.Е. Каухова. – М.: ГЭОТАР. – МЕД, 2004. – 560 с.
42. Никитина, А. С. Исследование тритерпеновых соединений иссопа лекарственного, культивируемого в условиях Ставропольского края / А. С. Никитина, О. И. Попова //Фундаментальные исследования. – 2011.- 11. -С.430-432.
43. Обоснование возможности использования лофанта анисового травы/ В.В. Чумакова [и др.]// «Гаммермановские чтения» научн.-метод. конф..- СПб., 2011.-С. 59-61.
46. ОФС 42-0013-03. Правила приемки лекарственного растительного сырья и методы отбора проб. – М., 2003. – 15 с.
53. Пустовалова, Н. Ароматный многоколосник / Н. Пустовалова// Сад и огород. – 2004. – 5. – С. 13-16.
54. Самылина, И.А. Фармакогнозия. Атлас: учеб. пособие: в 2-х т./И.А. Самылина, О.Г. Аносова. -М.: ГЭОТАР – Медиа, 2007. – Т. 1. – 192 с.
56. Свидетельство 31-07 об аттестации МВИ. Методика выполнения измерений содержания антиоксидантов в напитках и пищевых продуктах, биологически активных добавках, экстрактах лекарственных растений амперометрическим методом, разработанная ОАО НПО «Химавтоматика», аттестованная в соответствии с ГОСТ Р 8.563-96, ГОСТ Р ИСО 5725-2002 / Федеральное государственное унитарное предприятие «Всероссийский научно-исследовательский институт метрологической службы». Дата выдачи 4 мая 2007 г.-М., 2007.-21 с.
59. Сернов, Л.Н. Элементы экспериментальной фармакологии / Л.Н. Сернов, В.В. Гацура. – М., 2000. – 352 с.
62. Сухенко, Л. Т. Антимикробная активность масел, выделенных из растений астраханского региона/ Л. Т. Сухенко, Э. Р. Акмаев //Вестн. Алтайск. гос. аграр. универ-та.-2012. – Т. 2, . 88. – С. 57-59.
63. Тица, Н.У. Клиническая оценка лабораторных тестов: перевод с англ./ под ред. Н.У. Тица.- М.: Медицина, 1984. – 480 с.
64. Ткачев, А. В. Изменение состава эфирного масла при разных сроках хранения сырья /Ткачев, А. В. //Химия раст. сырья. – 2002. – Т. 1. – С. 19-30.
66. Тритерпеновые кислоты в траве лофанта анисового/ В.В. Чумакова, О.И. Попова, А.Б. Дмитриев, Т.Д. Мезенова//Фармация. -2013. -4. -С. 18-19.
67. Филипцова, Г.Г. Основы биохимии растений / Г.Г. Филипцова, И.И. Смолин. – Минск: БГУ, 2004. – 136 с.
68. Фурсов Н. В. Новое растение для Астрахани и России-лофант анисовый/ Н. В. Фурсов. – Астрахань: Астрахан. ун-т, 2009. – 124 с.
69. Хабриев, Р. У. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. 2-е изд., перераб. и доп. / Р.У. Хабриев- М.: Медицина, 2005. – 455 с.
72. Чумакова В.В. Определение галловой кислоты методом планарной хроматографии в траве лофанта анисового/ В.В. Чумакова, Т.Д. Мезенова, О.И. Попова// Мед. Акад. журн. – 2010. -Т. 10, 5. -С. 177-178.
73. Чумакова, В.В. Анатомо-диагностическое изучение травы лофанта анисового/ В.В. Чумакова, О.И. Попова// Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. трудов.- Пятигорск, 2013. – Вып. 68.-С. 137-139.
74. Чумакова, В.В. Биохимические особенности лофанта анисового, интродуцируемого в условиях Ставропольского края/ В.В.Чумакова, О.И. Попова, Л.С. Ушакова/ /Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. трудов.- Пятигорск, 2011.-Вып.67.- С. 138-140.
75. Чумакова, В.В. Изучение антиоксидантной активности извлечений травы лофанта анисового/ В.В. Чумакова, О.И. Попова, М.И. Кодониди// Вопр. биологич., мед. и фармац. химии. – 2012.- 12.- С.30-33.
77. Чумакова, В.В. Изучение фенольных соединений травы лофанта анисового/ Чумакова В.В. Попова О.И.//Фармация. – 2011. – 3. – С.20-22.
78. Чумакова, В.В. Количественное определение галловой кислоты в траве лофанта анисового/В .В. Чумакова, Т.Д. Мезенова, О.И.Попова// Мед. Вестн. Сев.Кав.-2010.-Т.20, 4.- С.75-76.
79. Чумакова, В.В. Определение галловой кислоты в траве лофанта анисового/ В.В. Чумакова, Т.Д. Мезенова, О.И. Попова// Химия раст. сырья. -2011.-4.-С. 269-271.
80. Чумакова, В.В. Определение содержания дубильных веществ в траве лофанта анисового / В.В. Чумакова, О.И. Попова// Актуальные проблемы фармацевтической науки и практики: сб. научн. тр. – Владикавказ, 2009. – С. 7073.
84. Яшин, Я.И. Природные антиоксиданты – надежная защита человека от опасных болезней и старения/ Я.И. Яшин, В.Ю. Рыжнёв, А.Я. Яшин, Н.И. Черноусова – М., 2008. – 122 с.
